六玄网自1月25日新西兰牛奶中发现了有害物质（双氰胺）被曝光后，六玄网132432一直关注事件发展，并积极安排对奶制品中双氰胺的高效液相色谱（HPLC)检测方案的实验。

双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。

表1 双氰胺的信息 

经实践检验，六玄网132432全新高性能的LC-10Tvp高效液相色谱仪，可以准确检验奶制品中双氰胺的含量，详细方案如下。（仅供用户参考）

1　 仪器与试剂

    1.1 仪器

　　LC-10Tvp高效液相色谱仪

　　涡旋振荡器

　　超声波清洗机

　　氮吹仪

六玄网　　新一代双氰胺净化管

　　Venusil® HILIC液相色谱柱

　　微孔滤膜

    1.2 试剂

六玄网　　双氰胺标准品（CAS： 461-58-5；FW=84.08）

　　乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯

　　实验用水为超纯水

2　 色谱条件(高效液相色谱HPLC法)

　　色谱柱：Venusil® HILIC（5μm，100Å，4.6*250mm）

六玄网　　流动相： 10mmol/L乙酸铵（pH=4.0），乙腈=15: 85；

　　波长：220nm

　　进样量：10µl

　　柱温：30℃

　　流速：0.8mL/min

3　 测定原理

六玄网样品加水溶解，加乙腈超声提取，离心涡旋，经高效液相色谱仪测试 ，外标法定量。

4　 实验步骤

六玄网称取1g试样于50mL具塞离心管中，加2mL水，涡旋30s，加2ml乙腈涡旋30s。再往现有的提取液中加2mL乙腈，重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次，得到共计约10mL的提取液。以4000r/min离心5min，将全部上清液加入新一代双氰胺净化管中（500mg/15mL），将MAS管上下晃动30s，然后涡旋30s，8000r/min离心5min，取全部上清液（约10ml）于玻璃试管中，50℃下氮气吹干，加入1ml乙腈复溶，过0.22μm微孔滤膜，待测。

六玄网注：1. 做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂，防止加标瞬间发生蛋白沉淀；

　　2. 乙腈提取分4次，为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快，影响提取效果。

5　 双氰胺标样图谱